MRS 고체 배지 제조

invitro-cosmos 2023. 3. 24. 12:15

* 재료 및 도구

: Magnetic bar, Magnetic stirrer, Mass Cylinder, autoclave, autoclave tape, 삼각 flask, pipette, pipette tip, Petri dish

* Process

① 1,000mL 삼각 flask를 준비한다.

② Magnetic stirrer에 Bottle을 놓고 MRS Broth(25.50g)와 D.W.(500mL)를 번갈아가면서 넣는다.

(Hotplate 온도 : 2시 방향)

(Magnetic bar를 넣고 stirrer를 작동시킨다.)

③ MRS와 D.W.가 잘 섞었을 때 1mL pipette로 Tween80 0.5mL를 넣는다.

(Tween80은 점성이 있어 Autoclave한 pipette tip을 70% EtOH로 소독한 가위로 잘라서 사용한다.)

④ Agar powder 7.5g을 flask에 넣는다. (500mL의 1.5%의 양)

⑤ 완전히 stirrer한 후 magnetic bar를 꺼내준다.

⑥ Bottle의 뚜껑을 덮고 알루미늄 호일로 감싸준다.

(압력으로 인해서 autoclave 시 터질 수 있으므로 뚜껑은 살짝 열어둔다.)

⑦ Autoclave tape를 붙이고, Autoclave (121℃, 15min, 1.5atm)을 사용해 고압 멸균을 해준다.

(***Autoclave 주의사항 참조***)

⑧ Autoclave 후 petri dish에 절반보다 조금 많이 부어서 고체 배지를 만든다. (약 25mL)

(petri dish cover에 제조 날짜 및 제조자를 기입한다.)

⑨ Clean bench에서 건조시킨 후 배지가 굳으면 뒤집어 놓는다.