미생물 Main-culture

* 재료 : pre-culture한 균, autoclave한 MRS 액체 배지(250-mL 용량의 flask에 MRS 액체배지를 100mL 분주한다. x 3), pipette, incubator, cuvette, spectrophotometer

 

* Process

  ① 250-mL 용량의 flask에 100mL MRS 액체배지를 autoclave하여 준비한다.

      (3반복 실험을 위해 flask를 3개 준비한다.)

  ② Pre-culture를 통해 준비한 균을 microtube에 1.3mL씩 접종한다.

      (contamination 방지를 위해 clean bench에서 작업한다.)

  ③ 접종 직후 1mL를 취하여 cuvette에 담아 spectrophotometer를 사용하여 600 nm에서의 흡광도를 측정한다.

      (측정 전 cuvette port에 아무것도 없는 상태에서 air blank를 측정한다.)

  ④ 37℃, 200 rpm으로 설정된 incubator에 flask를 넣어 고정시킨 후 균 배양을 시작한다.

  ⑤ 2시간 간격으로 sampling을 하여 12시간까지 600 nm에서의 흡광도를 측정한 후 기록한다.

      (600 nm에서의 흡광도가 1을 넘기는 경우, 멸균수 또는 멸균배지를 사용해 희석한 후 측정값이 1 이하가 되게 한 후 측정한다.)

  ⑥ 3반복 실험을 통해 얻은 결과값의 평균과 표준편차를 반영한 생장곡선 그래프를 그린다.